No ensino de ciências, é relevante que o conhecimento docente permita que as práticas transformem conceções alternativas dos alunos por meio de Interações Educacionais (IE) efetivas. No entanto, no Chile ainda existe um modelo de ensino centrado no professor e distante da compreensão dos fenômenos naturais pelos alunos. Este estudo explora os elementos que caracterizam o conhecimento do professor sobre os conteúdos que fazem parte da IE em sala de aula, utilizando o modelo de Quartetos de Conhecimentos (QC). Por meio de um estudo qualitativo de casos múltiplos, são analisadas videogravações e entrevistas com dois professores de ciências de uma escola de financiamento misto da Região Metropolitana do Chile. A partir de uma abordagem interpretativa, os resultados categorizam o conhecimento dos professores sobre IE em três categorias: conceitual; dialógico-epistemológico e reflexivo. A IE coloca à prova o conhecimento do professor, cujo objetivo é trocar elementos simbólicos, mobilizando-os para identificar, refletir e agir em busca do trânsito conceitual e epistemológico de seus alunos. Conclui-se que o QC permite aprofundar o conhecimento docente em interação, embora seja necessário aprofundar a complexidade da IE na perspectiva do professor-pessoa, sua reflexividade, bem como os trânsitos cognitivos e emocionais do profissional e de seus alunos.